Лист винограда раскраска: Раскраска Виноград — детские раскраски распечатать бесплатно

Современная ампелография: генетическая основа формы листа и рисунка жилкования у винограда

Листья винограда ( Vitis spp.) Имеют пять основных жилок в ладьевидной структуре, лезвие поддерживается выступающим черешком, который обеспечивает оптимальное расположение листа. световой захват. Помимо этой консистенции, все остальные признаки Vitis spp.листья сильно различаются, демонстрируя поразительное разнообразие (Галет, 1952). Листья могут быть простыми, рассеченными до степени сложными или иметь любую степень лопастности, в различных формах и формах между этими двумя крайностями. Длина и углы между верхней (дистальной) и нижней (проксимальной) латеральными жилками создают множество морф листа, включая округлую (круговую), почковидную (почковидную) и сердцевидную (сердцевидную). Листья различаются по толщине, цвету, контуру поверхности, размеру и зубчатости.Не только листья различаются по морфологии в зависимости от генотипа, но некоторые сорта демонстрируют глубокую гетеробластию со сложными тенденциями формы внутри побега.

Возможно, самая уникальная особенность виноградных листьев заключается не в их глубоком морфологическом разнообразии, а в том, что это изменение было количественно определено в беспрецедентной степени по сравнению с другими культурами. Ампелография (Aμπελος, «виноградная лоза» и γραφος, «письмо») — это наука о фенотипическом различении виноградных лоз. Авторитетным ампелографическим справочником является Précis d’Ampélographie Pratique (Galet, 1952), переведенный на английский язык как A Practical Ampelography: Grapevine Identification (Galet, 1979), на котором заметно выделяются листья (среди других признаков) у большинства домашних и домашних животных. много диких лоз.Стимулом для многих ампелографов было раскрыть сложные синонимичные отношения имен, данных виноградным лозам, когда они перевозились между европейскими странами с использованием нескольких языков. Особая направленность на выявление различных генотипов была вызвана экономикой и концепцией терруара, поскольку конкретные генотипы лучше подходили для разных мест из-за геологии и климата. Другой пример важности ампелографии был продемонстрирован во время кризиса филлоксеры во Франции в конце 19 века (Mullins et al., 1992). Селекционные эксперименты и прививки требовали точного знания американской и европейской идентичности винограда. Конечно, молекулярная генетика еще не была открыта, и листья были заметным отличительным фенотипическим признаком лозы.

Здесь мы представляем комплексную ампелографическую оценку и демонстрируем генетическую основу морфологии листьев более чем 1200 сортов винограда. Эллиптические дескрипторы Фурье (EFD) контуров листа и анализ Прокруста кончиков лопастей, пазух и точек ветвления основных жилок обеспечивают глобальный анализ формы листа.Эти количественные признаки коррелируют с фенотипами, измеренными Галетом (1952), предполагая генетический компонент морфологии листьев, измеренной на разных континентах и ​​десятилетиях. Мета-анализ наших данных с ранее измеренными признаками демонстрирует корреляцию между формой листа и его шероховатостью, связывая морфологию с адаптивным признаком эпидермиса. Генетическая основа морфологии листа отражается в высоких оценках наследуемости наших признаков и корреляции со структурой популяции, географией и производственным использованием.Анализ РНК-Seq сложного листового спонтанного мутанта выявляет понижающую регуляцию идентичности меристемы и генов формирования паттерна листьев, а также соизмеримую повышающую регуляцию путей окислительного стресса, что указывает на преждевременное старение. Кроме того, в качестве первого шага к картированию генетической основы морфологии листа мы проводим исследование ассоциации всего генома (GWAS). Вместе наши данные демонстрируют прочную генетическую основу формы листьев и количественно измеряют степень естественной изменчивости винограда.Мы обсуждаем виноградный лист как потенциальную селекционную цель для борьбы с прогнозируемыми последствиями изменения климата для виноградарства.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Морфометрический анализ формы листа

Несмотря на то, что ампелография Galet (1952) является всеобъемлющей, ей более полувека, и она основана на измерениях признаков, которые не позволяют охватить всю форму и рисунок жилок на листьях. Кроме того, анализ проводился на коллекциях виноградной лозы, для которых в настоящее время отсутствует плотное генотипирование.Мы стремились не только найти генетическую основу для сложных морфов листьев, присутствующих в винограде, используя недавно генотипированную коллекцию гермоплазмы Министерства сельского хозяйства США (USDA) (Winters, CA; Myles et al., 2011), но и использовать современные морфометрические методы, такие как как EFD (Iwata et al., 1998; Iwata and Ukai, 2002; Chitwood et al., 2012b, 2012c, 2012d) и обобщенный анализ Прокруста (GPA) ориентиров жилкования листьев (Rohlf and Slice, 1990; Viscosi and Cardini, 2011 ) для глобальной количественной оценки вариации формы.

Мы измерили несколько признаков четырех листьев с каждой из двух лоз, представляющих более 1200 образцов виноградной лозы (более 9500 измеренных листьев; дополнительные наборы данных S1 и S2). Разнообразие присутствующих морф листьев может быть представлено простыми морфометрическими показателями округлости и соотношения сторон (AR; Рис. 1). Окружность [4π × (площадь ÷ (периметр) ² )], отношение площади к периметру контура, чувствительна к лопастям и зазубринам в контексте виноградных листьев.Такие сорта, как Champanel (DVIT2632) и Agawam (DVIT2630), имеют высокие показатели округлости и небольшие лопастные и цельные (без зубчатости) поля. Хотя эти сорта классифицируются как виноград, их происхождение известно как от винограда, так и от диких видов Vitis spp. (Agawam имеет Vitis labrusca в своем происхождении, а Champanel — Vitis champinii и V. labrusca ), что, возможно, способствует их экстремальной форме листьев. В отличие от этого, Ciotat (DVIT2107, DVIT0372) обладает сильно рассеченными до сложного состояния листьями и имеет чрезвычайно низкие значения округлости, отражающие увеличенный периметр по сравнению с площадью лезвия (рис.1). AR относится к отношению большой оси к малой оси подобранного эллипса. Листья со значениями AR, близкими к 1, имеют округлую форму независимо от того, имеют ли они дольки (Chasselas Dore, DVIT0373) или нет (Agawam, DVIT2630). Поскольку используется наиболее подходящий эллипс, любое отклонение от круговой морфы листа увеличивает значение AR, и чаще всего у винограда такое отклонение отражает увеличение ширины листа относительно длины (например, Donzillinho, DVIT2634; Olmo [035-11], DVIT 1809 ; Пино Мускус, DVIT1117; рис.1).

AR и округлость среди образцов винограда. Показаны усредненные значения AR (большая / малая ось подобранного эллипса) и округлости (отношение площади к квадрату периметра, умноженное на 4π) для 1213 образцов в коллекции зародышевой плазмы Министерства сельского хозяйства США. В этой популяции высокие значения AR указывают на листья с низким отношением длины к ширине, а листья с низкой округлостью имеют повышенную лопастность и зубчатость. Показаны листья из образцов с экстремальными значениями AR и округлости. На этом и последующих рисунках общее название (полужирный шрифт), место происхождения (курсив) и регистрационный номер (латинскими буквами) листьев указаны под фотографиями.[Цветную версию этого рисунка см. В статье в Интернете.]

На форму виноградных листьев влияют не только дольки, зазубрины и AR. Виноградные листья всегда имеют среднюю жилку (L ₁ ), две верхние (дистальные) боковые жилки (L ₂ ), две нижние (проксимальные) боковые жилки (L ₃ ), две черешковые жилки, отходящие дистально от нижней боковые вены (L ₄ ) и заметный черешковый синус (диаграмма см. на рис. 4В). Угловые расстояния между основными жилками и отчетливость черешковых жилок и пазухи являются одними из наиболее характерных признаков листьев, используемых Галетом (1952) для дифференциации сортов винограда.Чтобы зафиксировать эту информацию о форме, которая не представлена ​​в округлости и AR, мы выполнили EFD-анализ контуров листьев (рис. 2). Результирующие основные компоненты формы (ПК; с префиксом «sym» для обозначения того, что они объясняют «симметричную» вариацию формы) из анализа описывают интуитивно понятные качества формы листа, которые традиционно трудно определить количественно. Низкие значения symPC1 описывают отчетливые дольчатые и разнесенные черешковые жилки (Feteasca Neagra, DVIT 3255), тогда как высокие значения symPC1 описывают уплощенный кончик листа и более закрытую петиолярную пазуху (Hosargoon, DVIT2503).Как и низкие значения symPC1, низкие значения symPC2 описывают архетипическую морфу листа с выступающими лопастями (Gaschochi, DVIT2537), тогда как высокие значения symPC2 описывают листья с небольшими лопастями между нижними и верхними боковыми жилками и выступающим кончиком (Barlinka, DVIT0349). symPC3 — symPC5 описывают вариацию формы, связанную с отчетливостью долей, а также выступом и формой петиолярного синуса. Вместе пять ПК, проанализированных в этой работе, объясняют более 80% всех измеренных отклонений формы (рис. 2).

EFD с изменением симметричной формы. Показаны собственные листья, полученные в результате PCA на EFD, полученных из 9 485 листьев 1220 образцов. Показаны первые пять ПК и процентное отклонение симметричной формы, которое они объясняют. Для каждого ПК показаны собственные листья в точках -2 (синий) и +2 (оранжевый) sd вдоль оси ПК. Наложение собственных лепестков на ± 2 sd указывает на вариацию формы, объясняемую каждым ПК. Показаны репрезентативные листья образцов с экстремальными значениями ПК.ПК, полученные в результате анализа EFD, обозначаются как symPC, имея в виду объясняемую ими симметричную вариацию формы. Пять symPC, рассмотренных в этой статье, объясняют 84,4% всех проанализированных отклонений симметричной формы.

Прокрустовый анализ формирования рисунка жилков

Связь между рисунком жилок и формой листа у винограда очевидна. Расположение долей в значительной степени определяется расположением верхней (L ₂ ) и нижней (L ₃ ) боковых вен, а форма петиолярного синуса определяется углами разветвления черешкового корня. (L ₄ ) вены (рис.2–4). Такая взаимосвязь была отмечена у других видов (Dengler and Kang, 2001) и неудивительно, учитывая важную роль канализации ауксина как в жилке (Scarpella et al., 2006), так и в листе (Reinhardt et al., 2003; Koenig et al. др., 2009).

GPA паттерна жилкования. A, ПК, полученные в результате анализа Прокрустом «внешних ориентиров» (эти ПК обозначены как oPC). Во внешнем анализе есть 10 ориентиров, включая черешковое соединение, верхушку средней жилки (L ₁ ), верхушки левого и правого верхнего (дистальный; L ₂ ) и нижний (проксимальный; L ₃ ). ) долей, а также левой и правой верхней (Si _s ) и нижней (Si _i ) пазух.Для каждого ПК даны собственные листья на -2 (синий) и +2 (оранжевый) sd вдоль оси ПК, наложение этих листьев и процентное отклонение, объясненное ПК. Показаны репрезентативные листья из образцов с экстремальными значениями для каждого ПК. Три ПК, проанализированные во внешнем анализе, объясняют 63,5% дисперсии в этом наборе данных. B, аналогично A, за исключением того, что показаны ПК, полученные в результате анализа «внутренних ориентиров». Во внутреннем анализе есть шесть ориентиров, в том числе петиолярное соединение, точка ветвления средней жилки (L ₁ ), левая и правая основные точки ветвления верхней (L ₂ ) боковых вен, а также левая и правая точки ветвления между нижней (L ₃ ) и черешковой (L ₄ ) венами.Три ПК, проанализированные во внутреннем анализе, объясняют 75,8% дисперсии в этом наборе данных. Для визуального описания средней жилки (L ₁ ), верхних боковых вен (L ₂ ), нижних боковых вен (L ₃ ), черешковых вен (L ₄ ), а также верхних и нижних пазух (Si _{). s} и Si _i ), см. рисунок 4B.

Корреляция признаков друг с другом и с измерениями Гале (1952). A, Иерархическая кластеризация и тепловая карта корреляции признаков, измеренных в 1220 образцах, друг с другом.Верхний квадрант указывает значения корреляции P , а нижний квадрант указывает ρ Спирмена. Прямоугольник со сплошной линией указывает на высокую корреляцию между symPC1, округлостью и oPC1, признаками, относящимися к выступам и зазубринам. Прямоугольник с пунктирной линией указывает на высокую корреляцию между symPC3, iPC3, oPC2, AR, iPC1 и symPC4, измерениями, которые чувствительны к угловому расположению верхней и нижней боковых вен по отношению друг к другу. B, Черты, измеренные Гале (1952, 1979). Указаны и определены меры длины жилок (L ₁ –L ₄ ), синусового расстояния (Si _s и Si _i ) и углов между жилками (∠S и ∠S ‘).r — отношение длины к ширине; A, B и C — отношения длин жилок; S и S ′ — угловые расстояния между жилками; а low / highSup и low / highInf — это низкие и высокие оценки верхнего и нижнего долей. C, Иерархическая кластеризация и тепловая карта корреляции признаков, измеренных в этой статье, с характеристиками Гале (1952; обозначены светло-серым цветом на полях). Корреляция между 122 образцами, подобранными между коллекцией гермоплазмы Министерства сельского хозяйства США и Galet (1952). Прямоугольник со сплошной линией указывает на высокую корреляцию между измерениями лопастей Гале (1952) и измерениями лопастей и зубцов, измеренными в этой статье.Прямоугольник с пунктирной линией указывает на высокую корреляцию между измерениями Гале (1952) для углового расположения верхних и нижних вен с аналогичными признаками, измеренными в коллекции гермоплазмы Министерства сельского хозяйства США. P Значения отображаются от оранжевого до пурпурного (от меньшего к более значимому) и серого (незначительно [NS / NA]). Показатель ρ Спирмена обозначен синим (отрицательным), желтым (положительным) и белым (нейтральным) цветами.

Мы использовали регулярную морфологию виноградных листьев, чтобы выполнить оценку GPA на основе ориентиров жилкования.В первом анализе использовалось 10 ориентиров, в том числе кончики средней вены (L ₁ ), верхней (L ₂ ) и нижней (L ₃ ) боковых вен, верхней (Si _s ) и нижней (Si _i ) пазухи и петиолярный переход (рис. 3А). Компьютеры для этих ориентиров называются «внешними» (обозначаются «oPC»), потому что они попадают на край листа. Этот анализ чувствителен к лобингу. oPC1 объясняет 33,6% всех вариаций, охватывающих листья, которые полностью лишены лопастей (Red Ohanez, DVIT0499) и листья настолько лопастные, что являются технически сложными (Chasselas Ciotat, DVIT0372).oPC2 описывает отклонение, относящееся к долям, расположенным под углом к ​​верхушке листа (Summer Royal, DVIT2899), по сравнению с лепестками, расположенными под углом к ​​основанию (Chasselas Rose, DVIT0376). oPC3 описывает растяжение вдоль горизонтальной оси листа, как видно при сравнении образца 5-20 (DVIT1980) с Muscat Noir (DVIT0469).

Чтобы проанализировать схему ветвления жилок листа, мы провели «внутренний» анализ (обозначенный «iPC»). Средняя, ​​верхняя и нижняя вены имеют выступающие точки ветвления около черешкового соединения.Используя точки ветвления в качестве ориентиров, можно различить такие закономерности, как близость точек ветвления нижней вены друг к другу и расстояние между точкой ветвления средней вены от петиолярного сочленения (iPC1; рис. 3B). iPC2 объясняет различия, связанные с разделением точек ветвления верхней жилы и близостью точки ветвления средней жилы к черешку (как видно на Niunai [DVIT2094], что приводит к появлению «сплющенного» вида). Расположение петиолярного перехода относительно нижних точек ветвления объясняется iPC3, описывающим «низкое» петиолярное соединение Ciotat (DVIT2107) по сравнению с «высоким» переходом Agawam (DVIT2630).

Соответствие признаков признакам, измеренным Галетом и наследуемости

Поскольку форма листа точно соответствует паттерну жилкования, неудивительно, что многие из наших признаков значительно коррелированы (рис. 4A; дополнительные наборы данных S3 и S4). Корреляция черт выявляет две интуитивно понятные группы черт. Первый (рис. 4A, прямоугольник со сплошной линией) представляет собой совокупность признаков, объясняющих выступы и зазубрины, включая округлость (рис. 1), symPC1 (рис. 2) и oPC1 (рис. 3A). Второй (рис.4A, пунктирная линия) включает две подгруппы, каждая из которых относится к угловому расположению лепестков. Первая подгруппа состоит из признаков, объясняющих компактность и округлость листа, включая AR (рис. 1), symPC4 (рис. 2) и iPC1 (рис. 3B). Вторая подгруппа включает признаки, относящиеся к расположению петиолярного сочленения относительно точек ветвления нижних боковых вен, включая symPC3 (рис. 2), oPC2 (рис. 3A) и iPC3 (рис. 3B).

Характеристики жилкования и формы листа коррелируют, потому что они описывают атрибуты листа, на которые влияют сходные лежащие в основе явления (например,грамм. ауксин). Точно так же можно ожидать, что совершенно разные измерения морфологии листа будут коррелировать с нашими измерениями. Мы стремились определить, коррелируют ли характеристики листьев, полученные Galet (1952), с нашими измерениями.

Измерения Galet (1952) включают длину жилок (L ₁ –L ₄ ) и их отношения (A, B, C), глубину синуса (low / highSup, low / highInf) и угловые различия между жилки (S и S ‘; рис. 4Б). Чтобы убедиться, что мы сравнивали правильные генотипы, мы собрали измерения Galet (1952) для 122 сортов с однозначным соответствием названия / синонима гермоплазме Министерства сельского хозяйства США (дополнительный набор данных S5).Кластеризация наших измерений признаков вместе с измерениями Гале (1952) демонстрирует устойчивость двух основных категорий признаков, упомянутых ранее (рис. 4C; дополнительные наборы данных S6 и S7). Измерения Galet (1952) для глубины синуса (low / highSup, low / highInf) наиболее близко группируются с нашими измерениями выступов и зазубрин (рис. 4C, прямоугольник со сплошной линией), тогда как измерения Galet (1952) для углового расстояния (S и S ‘) наиболее тесно связаны с нашей совокупностью черт, относящихся к расположению долей и жилок (рис.4С, пунктирная линия).

Значительная корреляция между нашими признаками и признаками Гале (1952) наводит на мысль о важном генетическом компоненте, лежащем в основе морфологии листа у Vitis spp. Измерения Гале (1952) были сделаны не только на разных виноградных лозах, но и более полувека назад на другом континенте, и корреляция демонстрирует преобладание генетических влияний над существенными различиями в окружающей среде.

Чтобы формально продемонстрировать наследуемость формы листьев у виноградных лоз, мы оценили значения наследуемости наших признаков, используя метод геномного разделения, который учитывает дисперсию, относящуюся к структуре популяции и загадочному родству (Таблица I; Yang et al., 2011). По оценкам, почти половина наших признаков имеет относительно высокую наследуемость ( h ² ≥ 0,4), тогда как остальные обладают наследуемостью промежуточных значений (0,2 < h ² <0,4). Высокая наследуемость по размерам листьев (Tian et al., 2011) и форме (Langlade et al., 2005; Chitwood et al., 2013) была продемонстрирована на кукурузе ( Zea mays ), Antirrhinum spp. И томат ( Solanum lycopersicum ).Здесь мы демонстрируем у Vitis spp. что формирование сосудистого рисунка, помимо формы листа, также является в высшей степени наследуемым атрибутом морфологии листа.

Оценки наследуемости признаков с учетом структуры популяции и загадочного родства описаны Yang et al. (2011). Предоставляется признак, номер образца и оценка наследуемости.

Фенотипический контекст формы листа: особая связь с ягодами и шерстью

Листья — это не только основные фотосинтетические органы растений. В качестве архетипа по умолчанию, от которого происходят другие органы (Goethe, 1817; Friedman and Diggle, 2011), генетические программы развития, которые регулируют форму листа, могут глобально влиять на морфологию боковых органов по всему растению. Из-за центральной важности листьев естественные вариации формы листьев могут ограничивать фенотипы в разрозненных органах. Например, ранее мы показали, что у помидоров взаимосвязь между формой листа и уровнем сахара в плодах. Эта взаимосвязь возникает либо из-за общих путей развития между листьями и ягодами, либо из-за косвенного воздействия на эффективность фотосинтеза, обеспечиваемого разными морфами листьев (Chitwood et al., 2013). Аналогичным образом, как форма листьев вписывается в более широкий фенотипический контекст виноградной лозы?

Мы собрали 36 различных фенотипов, измеренных за несколько лет (всего 75 признаков), из Информационной сети по ресурсам зародышевой плазмы Министерства сельского хозяйства США (GRIN; дополнительный набор данных S8). По каждому признаку было измерено как минимум 117 лоз. Корреляция признаков GRIN с нашими признаками и друг с другом (дополнительные наборы данных S9 и S10) и последующая иерархическая кластеризация (рис. 5A) показывает, что фенотипы морфологии листа очень самокоррелированы (рис.5А, серый ящик). Некоторые из наших черт формы листьев группируются из этого созвездия, включая symPC2, oPC3 и iPC2 (дополнительный рис. S1, желтая рамка). Эти черты связаны с угловым расположением дистальных (L ₂ ) и проксимальных (L ₃ ) боковых вен (рис.2 и 3), но, что более важно, объясняют вариации, при которых непосредственная близость этих вен практически исключает полость нижней пазухи (Si _i ; рис. 4B). Важно отметить, что эти черты тесно связаны с другим морфологическим признаком — отсутствием выроста лезвия за пределы черешковых вен по краю пазухи (так называемые «голые вены»; дополнительный рис.S1). Эти аспекты формы листьев связаны с Бриксом в ягодах и другими важными характеристиками фруктов, включая вкус, верность и отсутствие косточек (дополнительный рис. S1). Учитывая, что большая часть сахара в зрелых ягодах в конечном итоге происходит из фотосинтата листьев (Davies and Robinson, 1996), эти результаты согласуются с гипотезой о том, что форма листа может влиять на фотосинтез и, следовательно, на накопление ягодного сахара, как первоначально предполагалось в томатах ( Chitwood et al., 2013).

Мета-анализ признаков с данными GRIN. A, Иерархическая кластеризация и тепловая карта корреляции признаков с присутствующими в GRIN. Семьдесят пять признаков GRIN (представляющих 36 различных фенотипов, измеренных за несколько лет в коллекции гермоплазмы Министерства сельского хозяйства США) иерархически сгруппированы с признаками, измеренными в этой статье. Большинство характеристик, измеренных в этой статье (черные прямоугольники), сгруппированы вместе (серая рамка). P Значения отображаются от оранжевого до пурпурного (от меньшего к более значимому) и серого (незначительно, [NS / NA]).r — отношение длины к ширине, обозначенное синим (отрицательным), желтым (положительным) и белым (нейтральным) цветом. B, крупный план серого прямоугольника на рисунке A. Черты, относящиеся к угловому расположению верхней и нижней вен, наиболее тесно коррелируют с плотностью трихомов (LEAF_HAIR и SHOOT_HAIR) и формой петиолярного синуса (PETSINMALF). C и D, значимые корреляции AR (C) и iPC3 (D) с плотностью трихомов GRIN и побегов показаны в виде прямоугольных диаграмм, наложенных на значения дрожания. Предусмотрены значения для корреляций P , контролируемые FDR.

Наиболее заметная взаимосвязь между морфологией листа и другими признаками — это густота (рис. 5B). Оба признака, относящиеся к угловому расположению боковых жилок (рис. 4, A и C, пунктирная линия в квадрате), а также выступам и зазубринам (рис. 4, A и C, сплошная квадратная линия), тесно связаны с плотностью трихом на листьях и побеги (рис. 5, Б – Г). В эту группу признаков также входит форма черешкового синуса (рис. 5B, PETSNIMALF), которая ассоциируется с другими показателями углового расположения вен.

Корреляция плотности трихомов листа с формой листа связывает макроморфологические и микроморфологические особенности листа, эта взаимосвязь описывается редко (McLellan, 2005). То, что сложные аспекты ламинарного роста, структуры жилок и особенностей эпидермиса отслеживают друг друга у одомашненных сортов винограда, наводит на мысль, что эти черты регулируются общими путями развития. То, что этот набор признаков листа может изменяться вместе в ходе эволюции, имеет интересные последствия для адаптивного значения морфологии листа.Форма листа отражает осадки и температуру в летописи окаменелостей (Bailey and Sinnott, 1915; Wolfe, 1971; Greenwood, 1992; Wilf et al., 1998; Chitwood et al., 2012a), факторы окружающей среды, тесно связанные с функцией трихом в поддержание пограничного слоя, терморегуляция и отражательная способность поверхности листа — все это факторы, имеющие решающее значение для фотозащиты виноградных листьев (Liakopoulos et al., 2006).

Структура популяции и морфология листьев

Как описано ранее, генетическая структура популяций винограда разделена по оси Запад-Восток, исходящей в Европу и Азию из центра одомашнивания на Ближнем Востоке (Aradhya et al., 2003; Myles et al., 2011). С географической структурой населения винограда связано также и производственное использование, в котором винный виноград преобладает на Западе, а столовый виноград — на Востоке (рис. 6). Генетическая структура одомашненного винограда частично определяется местными дикими популяциями Vitis sylvestris , с которыми местные сорта винограда пересеклись (Myles et al., 2011). Чтобы изучить, какие признаки наиболее точно соответствуют истории одомашнивания, структуре популяции и локальному ауткроссированию у винограда, мы сопоставили признаки с ранее описанными ПК, описывающими генетическую структуру («genoPCs»; дополнительный набор данных S11).

Популяционная структура винограда и образцов V. sylvestris . Результаты PCA отражают структуру популяции дикого и одомашненного винограда. Генотипические ПК называются генотипическими ПК, чтобы отличать их от ПК с другими признаками, используемыми в этой статье. Графики genoPC1 и genoPC3 (объясняющие 6,35% и 2,31% генотипических вариаций соответственно) с образцами винограда, окрашенными по месту происхождения (A; западный, черный; центральный, оранжевый; восточный, пурпурный) и по типу производства (B; вино, синий; таблица, желтый).На обоих графиках западный и восточный образцы V. sylvestris обозначены черным и пурпурным цветом соответственно. genoPC1 и genoPC3 показаны из-за их явной корреляции с признаками. Обратите внимание, что genoPC1 объясняет восточную и западную популяционную структуру, тогда как genoPC3 объясняет центрально-специфические паттерны дисперсии. Указан образец V. sylvestris DVIT2426, который был отобран.

После множественной корректировки теста только небольшая часть формы листа и признаков GRIN коррелирует с genoPCs, в основном genoPC1 и genoPC3 (дополнительная таблица S1; дополнительный набор данных S12).Эти признаки принадлежат исключительно к вышеупомянутому комплексу признаков шероховатости, лопастей и зубчатости, а также углового положения жилок (дополнительная таблица S1; рис. 5B и 7, A, B и E). Эти черты значительно коррелируют с genoPCs, описывающими континуум популяционной структуры с запада на восток (genoPC1; рис. 6 и 7D) или паттерн генетического разнообразия Ближнего Востока и запада и востока (genoPC3; рис. 6 и 7G) демонстрирует, что эта совокупность признаков тесно связана с историей одомашнивания и производственным использованием винограда.

Корреляция между признаками и генотипическими ПК. A, прямоугольные диаграммы значимых корреляций между genoPC1 и genoPC3 с показателями GRIN плотности трихом и округлости листа. Приведены скорректированные по Бонферрони значения P . От B до G, iPC3 (B – D) и AR (E – G) — это два признака, которые коррелируют не только с genoPCs (genoPC1 и genoPC3 соответственно), но также с типом продукции и географическими атрибутами образцов (iPC3 с типом продукции и AR с географией). Для genoPC1 / iPC3 и genoPC3 / AR представлены корреляции между genoPC и признаком, а также различия по типу производства и географии в виде прямоугольной диаграммы, а цветная карта показывает средние значения признаков для образцов по странам происхождения. Обратите внимание, что для iPC3 выбранный образец тунисского образца (DVIT2426; обозначен звездочками на прямоугольных диаграммах и картах) имеет значения признаков, напоминающие таковые для винного винограда, который преимущественно населяет западную Европу около Туниса. Значения iPC3 уменьшаются с запада на восток, отражая корреляцию с genoPC1.Точно так же AR листьев тунисского образца напоминает таковой у западных сортов, а самые низкие AR обнаруживаются в листьях центральных образцов, что отражает центрально-специфический паттерн генотипической дисперсии, объясняемый genoPC3, с которым коррелирует AR.

Поскольку местные популяции V. sylvestris влияют на генетическую структуру винограда, интригующая гипотеза состоит в том, что дикие популяции изменили фенотип одомашненного винограда посредством интрогрессии. В соответствии с этой идеей, для тех черт, которые коррелируют с категориальными классификациями (дополнительная таблица S2; дополнительный набор данных S13) производственного использования (iPC3; рис.7C) или географии (AR; рис. 7F), фенотип западного / винного винограда близко соответствует фенотипу образцов V. sylvestris , взятых из популяции в Тунисе (DVIT2426). Следует отметить, что эта популяция демонстрирует другие неоднозначные черты винограда, такие как зеленые ягоды, что, возможно, указывает на гибридизацию или одичавшие отношения с местным виноградом. Фенотипический и генотипический отбор более популяций V. sylvestris необходим для подтверждения фенотипической ассоциации популяций винограда с местным V.Сильвестр . Если это будет продемонстрировано, это будет означать, что местное одомашнивание сортов винограда было частично вызвано интрогрессией потенциально адаптивных признаков у аборигенных популяций V. sylvestris .

Изменения экспрессии генов и кандидатные локусы, регулирующие форму листа

Обширные знания о сетях регуляции генов, ответственных за формирование паттерна листьев, существуют в модельных организмах (Barkoulas et al., 2007; Husbands et al., 2009). Однако примеров естественной изменчивости, модулирующей форму листа, и количественной генетической основы сложной морфологии листа по-прежнему мало (Langlade et al., 2005; Тиан и др., 2011; Chitwood et al., 2013). Чтобы понять пути развития, регулирующие сложные формы листьев, мы выполнили анализ РНК-Seq на верхушках кончиков растущих побегов Chasselas Dore (DVIT0689) и Chasselas Ciotat (DVIT0372) (Supplemental Data Set S14). Эти две разновидности являются клонально родственными (Myles et al., 2011), и было высказано предположение, что Chasselas Ciotat, возможно, произошел от Chasselas Dore как спонтанное мутантное событие. Несмотря на клональное родство, эти разновидности имеют разную морфологию (рис.1), поскольку технически Chasselas Ciotat имеет сложные листья.

2977 генов, значительно подавленных (коэффициент ложного обнаружения [FDR] <0,05) в верхушке побега Chasselas Ciotat по сравнению с Chasselas Dore (дополнительный набор данных S14), обогащены терминами онтологии генов (GO), относящимися к транскрипции, ДНК связывание и ядерная локализация (дополнительный набор данных S15). В основе этих терминов GO лежат ключевые онтогенетические регуляторы идентичности меристемы и формирования паттерна листьев (Supplemental Data Set S16).Включены меристема цветков (гомологи AGAMOUS-LIKE), ауксин (гомологи AUXIN-RESPONSE FACTOR), цитокинин (гомологи HISTIDINE KINASE и RESPONSE REGULATOR), РНК-интерференция (ARGONAUTE и DICER-LIKEs) и гомологи эпигенетических регуляторов. в качестве гомологов гомеобокса (ARABIDOPSIS THALIANA HOMEOBOX, BEL1-LIKE HOMEODOMAIN и KNOTTED-LIKE HOMEOBOX) и транскриптов домена NAC. Интересно, что помимо этих явных регуляторов развития апикальной меристемы побегов, гены регуляции света (включая PHYTOCHROME, PHYTOCHROME-INTERACTING FACTOR, PHYTOCHROME-INTERACTING FACTOR-LIKE, и SUPPRESSOR OF PHYA гомологов) подавляются у Chasselas Ciotat.

Напротив, гены со значительным повышением регуляции (2370 генов; FDR <0,05) у Ciotat по сравнению с Chasselas Dore (дополнительный набор данных S14) обогащены терминами GO, касающимися энергетического метаболизма, митохондрий, транспорта электронов, трансляции, модификаций клеточной стенки и микротрубочки (дополнительный набор данных S17). Эти гены составляют преобладание транскриптов рибосомных белков, цитохромов, гидролаз, обменников катион / H ⁺ , тубулина и факторов, регулирующих микротрубочки (дополнительный набор данных S18).Учитывая связь между окислительным стрессом и старением листьев (Gepstein et al., 2003; Woo et al., 2004), наши результаты предполагают, что, связанные со сложным фенотипом листьев Chasselas Ciotat, идентичность меристемы и пути формирования рисунка листьев снижаются. регулируется по мере продвижения дифференцировки и старения листьев.

Анализ экспрессии генов информирует о сетях регуляции генов, вносящих вклад в экстремальные фенотипы у нескольких сортов, но каковы полиморфизмы, управляющие морфологией листьев у одомашненного винограда? Мы выполнили GWAS для наших признаков, используя генотипическую информацию (представляющую более 5000 однонуклеотидных полиморфизмов [SNP]), ранее собранную на виноградных лозах, использованных в этом исследовании (Myles et al., 2011). После настройки нескольких тестов только несколько SNP остаются в значительной степени связанными с цикличностью, oPC1, iPC3 и iPC2 (рис. 8; дополнительный набор данных S19). Круговидность, oPC1 и iPC3, совокупность признаков, описывающих лопастные и нисходящие черешковые соединения высоколопастных разновидностей (рис. 1 и 3), связаны с одним регионом на хромосоме 1, охватывающим приблизительно 2,8 мб (рис. 8A). iPC2 (рис. 3B) связан с маркером на хромосоме 6 (рис. 8A). Вокруг обоих этих локусов находятся многочисленные известные регуляторы развития листьев, и гены, по-разному экспрессируемые между Chasselas Ciotat и Chasselas Dore, также могут быть наложены на эти области (рис.8, Б и В). Учитывая высокую наследуемость наших признаков (Таблица I), дальнейшее развитие ресурсов генотипирования Vitis spp. (т.е. повторное секвенирование генома), фенотипический анализ сегрегационных популяций и достаточно мощные исследования GWAS могут разрешить локусы, регулирующие форму листа в будущем (Myles et al., 2011).

GWAS-картирование признаков листьев. A. Значимые ассоциации между генетическими маркерами, измеренные Myles et al. (2011) и характеристики листьев, определенные с помощью EMMAX (Kang et al., 2008). Отрицательные логарифмически преобразованные значения P , обозначенные синим и зеленым цветом для чередующихся хромосом, показаны по длине генома с пороговым значением P с поправкой Бонферрони (0,05), обозначенным пунктирной красной линией. oPC1 и округлость в значительной степени связаны с одним и тем же полиморфизмом на хромосоме 1. iPC3 ассоциируется с ближайшим маркером на хромосоме 1, а iPC2 ассоциируется с маркером на хромосоме 6. B, расширенный вид выделенных желтым цветом областей в A, показывающий значительно связанные маркеры с iPC3, oPC1 и округлость на хромосоме 1 (синие линии).Оранжевые линии указывают на гомологи, регулирующие развитие листа в пределах 2 Mb в любом направлении (названия серого цвета под графиком). Положения дифференциально экспрессируемых генов между Chasselas Ciotat и Chasselas Dore и их логарифмические значения ₂ -кратного изменения (ось y ) обозначены точками (размер пропорционален значимости). C, аналогично B, показывает расширенный вид выделенной розовым цветом области в A для SNP, связанного с iPC2.

ОБСУЖДЕНИЕ

Наши результаты свидетельствуют о сильной генетической основе, лежащей в основе сложных фенотипов, измеренных в этой работе и ранее ампелографами (Galet, 1952; рис.4). Большой процент формы листа и рисунка жилкования демонстрирует высокую наследуемость (рис. 1–3; таблица I). Интересно, что фенотипы сложной формы коррелируют с особенностями эпидермиса, такими как гирсутильность и репродуктивные черты, обнаруживая, что несопоставимые, потенциально адаптивные и экономически значимые фенотипы совмещаются (рис. 5). Морфология листа также коррелирует со структурой популяции, географией и производственным использованием (рис. 6 и 7), а анализ экспрессии генов показывает, что модуляция консервативных путей, регулирующих развитие апикальной меристемы побегов, влияет на форму листьев у одомашненного винограда.Каковы функциональные последствия разнообразной морфологии листьев, присутствующей в винограде, и, учитывая генетическую основу формы листьев, можно ли использовать ее на практике, путем селекции или трансгенной обработки?

Было высказано предположение, что сердцевидные листья лиан, таких как виноград, играют структурную роль, уравновешивая лезвие на вершине черешка (как консоль), чтобы обеспечить легкую добычу пищи за счет расположения листьев (Givnish and Vermeij, 1976). У винограда листья располагаются в дневное время, чтобы избежать чрезмерной плотности потока фотонов (Gamon and Pearcy, 1989).Лопаточки, расслоение и зазубрины на виноградных листьях важны для проникновения света сквозь крону, предотвращая не только возникновение грибковых инфекций (Spotts, 1977; Lalancette et al., 1988; Boso et al., 2010; Austin et al., 2011; Austin and Wilcox, 2012), но влияя на развитие кластеров и состав ягод (Crippen, Morrison, 1986; Hunter et al., 1991; Morrison and Noble, 1990). Плотность трихомов сильно варьируется в виноградных листьях, не только защищая от патогенов, но и обеспечивая фотозащиту фотосинтетического аппарата (Liakopoulos et al., 2006), терморегуляции и поддержании пограничного слоя. Точно так же структура жилок и их расстояние до ламинарного мезофилла влияет на гидравлическую эффективность и фотосинтетические характеристики (Brodribb et al., 2007; Sack and Scoffoni, 2013).

Функциональное значение листьев является своевременным, поскольку было продемонстрировано, что факторы окружающей среды, которые изменятся при изменении климата, влияют на виноград через листья. Повышение концентрации CO ₂ увеличивает скорость фотосинтеза, урожайность и эффективность использования воды за счет изменения морфологии листьев, увеличения толщины, размера клеток и уменьшения плотности устьиц (Moutinho-Pereira et al., 2009; Rogiers et al., 2011). Повышенный уровень CO ₂ непропорционально влияет на вегетативные признаки, а не на репродуктивные, а вызываемая им увеличенная площадь листьев и частичное закрытие устьиц имеет важные последствия в отношении терморегуляции, а также управления водой и растительным покровом (Bindi et al., 1996a, 1996b). Несмотря на кажущиеся благоприятными физиологические изменения в ответ на увеличение концентрации CO ₂ , ожидается, что урожайность и качество винограда пострадают при рассмотрении других переменных изменения климата.Повышенное УФ-В излучение снижает рост листьев, общую биомассу и фотосинтетическую способность и модулирует концентрации флавоноидов и фенолов в листьях (Tevini and Teramura, 1989; Krupa, Jäger, 1996; Jansen et al., 1998; Schultz et al., 1998; Schultz) , 2000; Колб и др., 2001). Регионы могут стать неприветливыми для определенных виноградных лоз, что в основном определяется широтой и температурой (Джексон и Черри, 1988), разделением комбинаций температуры, типов почвы, топографии и культивирования, которые терруар пытается сохранить.Ожидаемое повышение температуры, по прогнозам, сместит границы европейского виноградарства на север на целых 10-30 км за десятилетие (Kenny and Harrison, 1993) и сократит производство винограда премиум-класса в Соединенных Штатах до 81% (White et al. ., 2006). Недавние исследования подтверждают прогнозы существенного воздействия изменения климата на виноградарство (Hannah et al., 2013), хотя степень смягчения последствий в результате селекции, культивирования и маркетинговых инноваций является предметом споров (van Leeuwen et al., 2013).

Изменения морфологии листьев в связи с изменением климата не являются беспрецедентными, как видно из летописи окаменелостей. Более крупные цельные листья преобладали в исторически более влажном и теплом климате, тогда как более мелкие и более рассеченные листья были обычны в более прохладном и сухом климате (Bailey and Sinnott, 1915; Wolfe, 1971; Greenwood, 1992; Wilf et al., 1998; Chitwood et al. ., 2012а; Sack et al., 2012). Точно так же структура жилкования функционально меняется в зависимости от климата и палеоистории (Sack and Scoffoni, 2013).Подобно тому, как морфология листьев изменилась с течением геологического времени, селекция может быть использована для изменения морфологии виноградных листьев в ближайшие десятилетия, чтобы помочь смягчить негативное влияние изменения климата на виноградарство, учитывая (1) огромные естественные вариации в листьях винограда и (2) его сильная генетическая основа. Будучи описательным, искусство и наука ампелографии в сочетании с количественной генетикой и физиологическими исследованиями потенциально могут улучшить и сохранить традиции виноградарства.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Растительные материалы и фотографии

Фотографии листьев были собраны с виноградных лоз ( Vitis spp.) поддерживается Национальным репозиторием клональной зародышевой плазмы Министерства сельского хозяйства США в Уинтерсе, Калифорния. С 28 мая по 1 июня 2011 г. было собрано более 9500 листьев более чем 1200 различных одомашненных сортов винограда ( Vitis vinifera ). Большинство сортов было представлено двумя клональными лозами, с каждой из которых было отобрано по четыре листа (так что восемь листья были отобраны у большинства сортов). Если возможно, последовательные листья одинаковой стадии развития отбирали из середин двух побегов на каждой лозе.Все листья были полностью распущены, но не настолько стары, чтобы начать стареть. Каждый день из всей популяции случайным образом отбирали виноградные лозы. Образцы собирали до полудня, помещали в пакеты Ziploc и помещали в холодильник. Листья оставались в холодильнике в холодной комнате с температурой 4 ° C не более 48 часов перед фотографированием.

Листья располагали под неотражающим стеклом над световым коробом (FB-WLT-1417; Fisher Scientific) так, чтобы жилки (для анализа Прокруста) были четко видны.Камеры Olympus SP-500 UZ были установлены на копировальных стендах (Adorama; 36-дюймовый Deluxe Copy Stand) и управлялись дистанционно с компьютера с помощью программного обеспечения Cam2Com (Sabsik). Всего на сайте www.chitwoodlab.org можно загрузить 4950 необработанных фотографий, в названии которых указано положение виноградника, которое может быть использовано для определения генотипа (дополнительный набор данных S2).

Морфометрический анализ

С использованием настраиваемых макросов ImageJ (Abramoff et al., 2004) отдельные листья были извлечены как двоичные изображения и названы соответствующим образом.Для тех листьев, в которых области пазухи были закрыты дольками, небольшая линия была нарисована вручную, чтобы более точно определить общий контур листьев. Затем контуры листа были обработаны в ImageJ для измерения округлости, плотности, AR и округлости.

Глобальный анализ формы листа был проведен с использованием EFD с последующим анализом главных компонентов (PCA) с использованием программы SHAPE (Iwata and Ukai, 2002). Контуры объекта были извлечены как цепной код. Код цепочки впоследствии использовался для расчета нормализованных EFD.Нормализация была основана на ручной ориентации относительно проксимально-дистальной оси листа. PCA был выполнен на EFD, полученных на основе первых 20 гармоник коэффициентов Фурье. Коэффициенты EFD были рассчитаны при -2 и +2 sd для каждого ПК, и соответствующие формы контуров были восстановлены с помощью обратного преобразования Фурье.

Исходные необработанные изображения использовались для GPA для определения точек ветвления вен, впадин пазух и вершин долей. Как описано в тексте, ориентиры были размещены на концах долей, пазухах и черешковом соединении для внешнего анализа, а также на точках ветвления основных вен и петиолярном соединении для внутреннего анализа.Координаты x и y были собраны с использованием настраиваемых макросов в ImageJ (Abramoff et al., 2004), был выполнен средний балл и полученные результаты PCA были получены в R (R Core Team, 2013) с использованием «фигур». ”(Драйден, 2013 г.) с функциями procGPA () и shapepca ().

Корреляционный анализ

Морфометрические признаки коррелировали (1) друг с другом, (2) измерения признаков, выполненные Галетом (1952), (3) фенотипы, присутствующие в GRIN, (4) генотипические ПК или (5) география и / или производственное использование.Для анализа признаков, измеренных Galet (1952), было проанализировано 122 образца, для которых можно было сделать окончательные совпадения по названию (дополнительный набор данных S5). Черты GRIN были получены из http://www.ars-grin.gov/cgi-bin/npgs/html/crop.pl?273. Было рассмотрено семьдесят пять признаков, измеренных за несколько лет (36 отличительных признаков). Как минимум, каждый признак имел значения для 117 образцов, представленных в коллекции гермоплазмы Министерства сельского хозяйства США (дополнительный набор данных S8). Генотипические ПК, географическая информация и производственное использование взяты из Myles et al.(2011) для 606 различных образцов (дополнительный набор данных S11).

Матрицы корреляции были рассчитаны с использованием функции rcorr () из пакета Hmisc (Harrell and Dupont, 2013) с соответствующими множественными тестовыми настройками с использованием функции p.adjust () в R (R Core Team, 2013). Для категориальных переменных (таких как география или производственное использование) вместо корреляции использовались тесты Краскала-Уоллиса с использованием функции kruskal.test (). Иерархическая кластеризация выполнялась с помощью функции hclust ().Результаты были визуализированы с помощью пакета ggplot2 (Wickham, 2009).

Расчет наследуемости

Наследственность рассчитывалась с использованием данных генотипа Myles et al. (2011) в сочетании с данными фенотипа, собранными в этом исследовании. Данные генотипа были доступны для 961 фенотипированного образца и включали 4015 SNP после удаления SNP с отсутствующими данными более чем на 20% и частотами минорных аллелей <0,01. Наследственность каждого признака оценивалась с использованием метода Yang et al.(2011). Вкратце, общая объясненная дисперсия (PVE) была оценена с использованием единой матрицы генетических отношений, а дисперсия, обусловленная популяционной структурой и загадочным родством (PVE.PS), была оценена с использованием количества SNP на хромосому в регрессионной модели. Затем была рассчитана наследуемость каждого признака как ч ² = PVE — PVE.PS.

Общегеномная ассоциация

Если оценки фенотипа не были нормально распределены (тест Шапиро, P <0.05), затем оценки были преобразованы с помощью функции «boxcox» в пакете MASS в R (Venables and Ripley, 2002; R Core Team, 2013). Параметр преобразования мощности Бокса-Кокса, лямбда, был выбран путем выбора значения лямбда (от -10 до 10), которое дает максимальное логарифмическое правдоподобие. Данные генотипа были доступны для 961 фенотипированного образца и включали 6 114 высококачественных SNP из массива Vitis9KSNP (Myles et al., 2011). GWAS был выполнен с использованием смешанной модели (Yu et al., 2006), реализованной в EMMAX (Kang et al., 2010) с матрицей идентичности по состояниям из PLINK (Purcell et al., 2007) в качестве случайного эффекта.

Картирование РНК-Seq и анализ дифференциальной экспрессии

РНК-Seq получали с использованием ранее описанных методов (Kumar et al., 2012). Чтения RNA-Seq были предварительно обработаны для удаления некачественных чтений (оценка phred <20) и загрязнения адаптера с помощью набора инструментов FastX (http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/) и пользовательских сценариев Perl. Отфильтрованные по качеству чтения из отдельных библиотек (по три реплики каждого сорта) были сопоставлены с базой данных эталонных транскриптов одомашненного винограда (загруженной с ftp: // ftp.jgi-psf.org/pub/compgen/phytozome/v9.0/Vvinifera/annotation/) с использованием выравнивателя Барроуза-Уиллера (BWA; параметры: bwa aln -k 1 -l 25 -n 0,04 -e 15 -i 10 и bwa samse -n 0; Li and Durbin, 2009), и только однозначно отображенные чтения были сохранены с использованием специального сценария perl для анализа дифференциальных выражений ниже по потоку. Уникально сопоставленные счетчики считываний для каждого гена были отфильтрованы с использованием пакета Bioconductor EdgeR версии 3.2.3, так что сохранялись только гены, которые имеют более двух считываний на миллион по крайней мере в трех образцах.Отфильтрованные подсчеты считывания были нормализованы с использованием метода усеченного среднего значения M с последующим анализом дифференциальной экспрессии генов между двумя сортами с использованием классического попарного сравнения EdgeR версии 3.2.3 (Robinson and Oshlack, 2010).

RNA-Seq, прочитанные из этой статьи, можно найти в Dryad под DOI 10.5061 / dryad.4d786.

Дополнительные данные

Следующие материалы доступны в онлайн-версии этой статьи.

Информация, рецепты и факты о виноградных листьях

3105 товаров

Яблоко

Абрикосы

Артишоки

Азиатский

Спаржа

Авокадо

Бананы

Фасоль

Свекла

Болгарский перец

Ягоды

Горькая дыня

Бок Чой

Брокколи

Брюссельская капуста

Капуста

Кактус

Морковь

Цветная капуста

Сельдерей

Мангал Швейцарский

Вишня

Каштаны

Цикорий

Цитрон

Цитрус

CM

Кокос

Кукуруза

Огурцы

Даты

Драконий фрукт

дуриан

Баклажан

Яйца

Эндив

Папоротники

Инжир

Цветы

Собранные корма

Fresh Origins

Чеснок

имбирь

Грейпфрут

Виноград

Зелень

Groc

Гуавас

Травы

Джамбу

мармелад

Кале

Киви

Кумкват

Листья

Лук-порей

Лимоны

Салат-латук

Лимау

Лаймы

Луло

Мамей

Мандарин

Манго

Мангустин

дыня

Микро Гринс

Грибы

Нектарины

Гайки

Окра

Репчатый лук

Апельсины

Org

Орнамент

Папайя

Маракуйя

Персики

Груши

Горох

Пепинос

Перец Чили

Перец сушеный

Перец

Хурма

Ананас

Сливы

Помело

Картофель

Тыквы

Айва

Редис

Рамбутан

Ret

Корень

Салак

Сапоте

Лук-шалот

Шпинат

Ростки

Кабачок

Стоунфрут

Танжелос

Мандарины

Помидоры

Tomatillos

Помидоры

тропический

Трюфель

Клубни

Репа

Кресс-салат

Дикий

Дерево

Фирма «Фрукты»

Овощи прочие

Разное

вектор гроздь винограда, декоративные виноградные листья и рюмки в черном.. Клипарты, векторы, и Набор Иллюстраций Без Оплаты Отчислений. Изображение 61107925.

Вектор гроздь винограда, богато украшенные виноградные листья и рюмки в черном, изолированные на белом.Наброски элементов дизайна для вина и винодельни. Фруктовые объекты в контурном стиле для раскраски и винного декора.

Таблица размеров

Используете это изображение на предмете перепродажи или шаблоне?

Распечатать Электронный Всесторонний

4167 x 4167 пикселей | 35.3 см x 35,3 см | 300 точек на дюйм | JPG

Масштабирование до любого размера • EPS

4167 x 4167 пикселей | 35,3 см x 35,3 см | 300 точек на дюйм | JPG

Скачать

Купить одно изображение

6 кредитов

Самая низкая цена
с планом подписки

• Попробовать 1 месяц по 2209 pyб
• Загрузите 10 фотографий или векторов.
• Нет дневного лимита загрузок, неиспользованные загрузки переносятся на следующий месяц

221 ру

за изображение любой размер

Цена денег

Ключевые слова

Похожие векторы

Нужна помощь? Свяжитесь с вашим персональным менеджером по работе с клиентами

@ +7 499 938-68-54

Мы используем файлы cookie, чтобы вам было удобнее работать.Используя наш веб-сайт, вы соглашаетесь на использование файлов cookie, как описано в нашей Политике использования файлов cookie

Top 20 Free Printable Leaf Coloring Pages Online

Лист антуриума Лист антуриума Лист клевера Лист клевера Лист вяза Лист вяза Кленовый лист Кленовый лист Белый дуб Белый дуб Осенние листья Осенние листья Осенние листья Листья березы Листья березы Осенние листья Падение листьев Малыш прыгает в листьях Малыш прыгает в Листья Подсчет листьев Подсчет листьев Подсчет листьев и желудей Листья и желуди Дети сгребают листья Дети сгребают листья Заяц, сидящий на листьях Заяц, сидящий на листьях Школьник с осенними листьями Школьник с осенними листьями Точка за точкой Лист Точка за точкой Части листа части листа части листа банана Лист Банановый лист Раскрасьте листья по номеру Раскрасьте листья по номеру Лист салата Лист салата L Для листа L Для листа

Рекомендуемые статьи:

Раскраски для листьев являются одновременно интересными и познавательными.Это позволяет вашим детям узнать о различных типах листьев и их характерных особенностях.

Лист — это продолжение стебля. Он широко варьируется по форме и размеру. Листья играют жизненно важную роль в таких процессах, как транспирация, дыхание и пищеварительный тракт у растений. Лист — это не просто часть растения. Это жизненно важно как для людей, так и для животных. Животные не могут готовить пищу. Таким образом, они зависят от растений и листьев для их ежедневного питания. Даже люди едят листья, такие как капуста, салат и шпинат.

В статье ниже мы обсуждаем раскраски из 20 листов для дошкольников. Эти листы-раскраски также дают вашему ребенку возможность отпраздновать смену времен года.

1. Осенний лист:

Осень — это листья, разбросанные повсюду. На этой раскраске изображена кучка кленовых листьев. Скажите ребенку, чтобы он раскрасил эту простыню коричневым, красным и желтым цветом.

• Знаете ли вы, почему осенью и зимой опадают листья? Это потому, что в это время года земля получает меньше солнечного света и воздух становится холодным.Жидкость не может входить и выходить. Это приводит к изменению цвета и опаданию.
• Опадание листьев не только знаменует конец сезона, но и помогает дереву выжить в холодном и сухом зимнем воздухе.

[Прочитано: Раскраски Красивые весенние цветы ]

2. Клен:

Эта раскраска с кленовым листом обязательно должна порадовать наших читателей из Канады. На рисунке изображен кленовый лист, который также является символом канадского флага.

• Лист широкий с глубокими выемками. Кленовый лист имеет три основные жилки, исходящие от основания листа. Листья имеют размер от 2 до 5 дюймов.
• Попросите ребенка раскрасить этот лист в оранжевый, красный или коричневый цвет; цвет, который он приобретает в осенний сезон.

3. Сгребание листьев:

На этом раскраске изображены девочка и ее мать, сгребающие листья на лужайке. Мелкие детали в этом раскраске должны позволить вашему ребенку попрактиковаться в мелкой моторике.Эта раскраска также учит детей различным аспектам фермерской жизни.

• Дети любят сгребать листья осенью, чтобы они могли прыгнуть в кучу.
• Спросите ребенка, чем он любит заниматься в осенний сезон — прыгать в кучу листвы или ездить на фермы.

4. Платан:

На этом раскраске изображен лист платана. Этот лист имеет форму руки с вытянутыми лопастями, которые похожи на пальцы руки.

• Платан американский — листопадное дерево, которое каждую осень теряет листья. Листья сначала буреют, а затем опадают.
• Это дерево обычно растет в лесах, озерах, прудах и на краю ручьев. Их также высаживают во дворах как тенистые деревья.

[Читать: Раскраски с фигурами ]

5. Ребенок прыгает в листьях:

Подготовьте ребенка к падению с помощью этой веселой раскраски. На нем изображен ребенок, прыгающий в листьях, а мать наблюдает за ним.

• Прыжки в кучу листьев — любимое занятие детей осенью.
• Эта раскраска помогает развить у вашего ребенка зрительно-моторную координацию и моторику, пока он раскрашивает эту забавную сцену.

6. Береза:

Вот раскраска березового листа. Это зубчатый лист эллиптической формы.

• Листья драпируют конец ветви дерева, придавая ему плачущую форму.
• К наиболее распространенным разновидностям березовых листьев относятся береза ​​желтая, береза ​​серая, береза ​​бумажная и береза ​​европейская белая.

7. Дуб белый:

Дуб белый — красивый длинный лист с выступами от пяти до девяти пальцев. Дерево обычно выращивают в лесах, прудах, ручьях и краях озер.

• Это ярко-зеленый лист с белой нижней стороной. Осенью лист становится красным или коричневым.
• Животные строят гнезда из листьев дикого дуба.

8. Лист салата:

Вот простая раскраска листа салата для вашего малыша.Lactuca sativa — однолетнее растение, принадлежащее к семейству сложноцветных.

• Листья сильно различаются по размеру и форме. В основном они имеют цвет от белого до светло-зеленого. Листья могут быть гладкими или фигурными.
• Листья салата в основном употребляют в качестве зеленого салата. Также из него готовят бутерброды, роллы и супы.

9. Вяз:

Лист вяза — один из самых красивых листьев, на которые можно взглянуть.

• Вязы — лиственные деревья, произрастающие в Северной Америке.Дерево впервые появилось в миоцене около 40 миллионов лет назад.
• Лист овальной формы сужается к концу. У него неровный зубчатый край. Размер листа полностью зависит от вида, но большинство листьев имеют длину от 10 до 15 см.

[Читать: Раскраски четырехлистный клевер ]

10. Тополь:

Лист тополя темно-зеленого цвета с бледно-зеленой нижней стороной. Он имеет восковое покрытие на нижней стороне листа.Лист у тополя толстый, яйцевидной формы.

• Тополь обладает приятным ароматом бальзама, за что и получил название тополь бальзамический.
• Листья попеременно растут на ветвях дерева с прикрепленными длинными стеблями. Некоторые листья имеют зубчатые края, а некоторые имеют зубцы по краям.

11. Клевер:

На этом раскраске изображен четырехлистный клевер, который нужно раскрасить на День Святого Патрика.

• Четырехлистный клевер, также известный как трилистник, представляет собой необычную разновидность листьев клевера.Считается, что если он найден случайно, он принесет удачу искателям. Каждый из четырех листьев клевера имеет определенное значение. Он символизирует веру, любовь, удачу и надежду.
• У некоторых клеверов более четырех листьев. Листья находятся на единственном стебле клевера.

12. Раскрась по номеру:

Подарите второкласснику веселую раскраску в эти выходные.

• На этой раскраске представлен набор листьев, которые ваш ребенок должен раскрасить в соответствии с назначенными цветами.
• Поощряйте своего ребенка его уникальным произведением искусства.

13. Подсчет листьев:

Вот простой лист с заданиями для вашего дошкольника.

• Попросите ребенка посчитать листья на раскраске. Затем попросите его окрасить каждый лист в разные оттенки.
• Вы можете обрамить и повесить эту раскраску в комнате вашего ребенка.

14. Части листа:

Это одна из интересных страниц раскраски с листиками, которая идеально подходит для обучения школьников различным частям листа.

• Большинство листьев имеют две основные части — пластинку и черешок. У некоторых листьев также есть третья часть, называемая прилистниками.
• Эта раскраска идеально подходит для детей от 10 лет. Это помогает развить их интерес к биологии и ботанике.

[Читать: Grapes Coloring Page ]

15. Осенние листья:

Попросите вашего ребенка нарисовать этим листом для раскрашивания набор осенних листьев.

• Ваш ребенок наверняка весело проведет время, раскрашивая каждый лист в разные цвета, такие как красный, зеленый, оранжевый и коричневый.
• Найдите время, чтобы поговорить с ним об изменении цвета осени. Листья содержат три пигмента — хлорофилл, антоцианин и каротин. Эти пигменты улавливают солнечную энергию для приготовления пищи.

16. Листья и желуди:

Когда листья меняют цвет и воздух становится холодным, вы знаете, что наступила осень.

• На этом раскраске изображены листья, кукуруза, тыква и желуди — традиционные символы осеннего сезона.
• Ваш ребенок может раскрасить эти листья фломастерами, красками и даже блестками. Это создаст осенний шедевр.

17. Точка к точке:

Раскраски «точка в точку» всегда являются забавным занятием для детей. Это помогает развить их навыки распознавания чисел.

• Попросите ребенка соединить точки в соответствии с порядком номеров.
• После того, как ваш ребенок соединит точки, он может раскрасить листья так, как ему нравится.

18. Банановый лист:

Вот простая раскраска бананового листа.

• Вы будете удивлены, узнав, что банановый лист содержит широкий спектр полифенолов, включая ЭКГК.
• Банановые листья имеют широкий спектр применения. Их используют для сервировки, приготовления и упаковки еды.

[Читать: Раскраски с буквой L ]

19. L для листа:

Вот лист для раскраски L для листа для вашего малыша.На рисунке представлено простое изображение листа с заглавными и строчными буквами L. Ваш ребенок также может начертить буквы с помощью этого раскраски.

• Этот лист для раскраски закладывает основу для хорошего почерка.
• Когда он закончит обводить буквы, скажите ему раскрасить лист в любой цвет, который ему нравится.
• Также раскраску можно украсить чередой, лентами, блестками и другими элементами декора.

20. Антуриум:

Это одна из красивых раскрашенных картинок с изображением листа антуриума.Антуриум — красивый и долговечный цветок, который выглядит как лист.

• У растения лопастные зеленые листья разного размера. У него выступающая средняя жилка и хорошо выраженный край.
• Створка может располагаться по часовой стрелке или против часовой стрелки.

Эти бесплатные онлайн-раскраски для распечатки листов идеально подходят для того, чтобы приятно провести время с детьми в прекрасный осенний вечер. Учителя тоже могут использовать эти бесплатные раскраски с листами для печати, чтобы весело провести время в классе.Пока ученики раскрашивают эти листы, попросите их описать свой любимый лист. Вы также можете создать свою собственную книжку-раскраску из листьев.

Родители и учителя, если вы знаете о раскраске, которую дети любят раскрашивать, сообщите нам об этом в поле для комментариев ниже. Мы хотели бы рассказать и другим на форуме.

ОТКАЗ ОТ ОТВЕТСТВЕННОСТИ: Считается, что все изображения, найденные здесь, находятся в «общественном достоянии». Мы не намерены нарушать какие-либо законные интеллектуальные права, права на произведения искусства или авторские права.Все отображаемые изображения неизвестного происхождения. Если вы являетесь полноправным владельцем любого из размещенных здесь изображений / обоев и не хотите, чтобы они отображались или вам требуется соответствующий кредит, свяжитесь с нами, и мы немедленно сделаем все необходимое для того, чтобы изображение стало быть удаленным или предоставить кредит там, где это необходимо.